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分光光度計(jì)測(cè)量誤差產(chǎn)生原因
  • 發(fā)布日期:2021-08-18      瀏覽次數(shù):1825
    •                                                          分光光度計(jì)測(cè)量誤差產(chǎn)生原因

                                                             檢碩科學(xué)器材(上海)有限公司

      分光光度計(jì)是利用物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收的特性,以較純的單色光作為入射光,測(cè)定物質(zhì)對(duì)光的吸收,從而物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的儀器。在使用過(guò)程中常常會(huì)出現(xiàn)測(cè)量誤差,這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢?


      1.1復(fù)色光對(duì)比耳定律的偏離

      比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光,但是精度再高的儀器,即使是雙單色器的分光光度計(jì),也只能獲得近乎單色的光,無(wú)法獲得純單色光,它仍然含有狹窄光通帶,具有復(fù)色光的性質(zhì)。而復(fù)色光會(huì)導(dǎo)致比耳定律的正或負(fù)偏離。


      固定狹縫的紫外分光光度計(jì)光譜帶寬一般為1nm或2nm,可調(diào)狹縫的可以做到0.Inm;可見(jiàn)分光光度計(jì)帶寬6nm、snm,甚至十幾納米。

      光譜帶寬應(yīng)該是越小越好,但是隨著光譜分辨率的提高,儀器的靈敏度降低,所以選擇儀器時(shí)要綜合考慮各種條件的影響。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時(shí),可近似認(rèn)為符合比耳定律。


      1.2雜散光的影響

      雜散光是指進(jìn)人檢測(cè)器的處于待測(cè)波長(zhǎng)光譜帶寬范圍外的其他波長(zhǎng)組分,它是光譜測(cè)量中誤差的主要來(lái)源。

      產(chǎn)生原因有:分光光度計(jì)的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計(jì)工作波段邊緣波長(zhǎng)處,由于單色器透光率、光源輻射強(qiáng)度、檢測(cè)器靈敏度都較低,雜散光的影響更為顯著。

      雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測(cè)量誤差,實(shí)際工作中,在定量分析時(shí),一般在吸收峰或其附近處測(cè)量樣品吸光度,如果在分析波長(zhǎng)處含有雜散光,這時(shí)樣品的透光率較小,而雜散光大部分透過(guò),使測(cè)量吸光度低于真實(shí)吸光度。


      1.3儀器噪聲對(duì)測(cè)定的影響

      儀器噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標(biāo),它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測(cè)量的分析信號(hào)中的不需要的信號(hào),掃描100%T和0%T線,可觀察到分光光度計(jì)的絕對(duì)噪聲水平,如果儀器噪聲較大,會(huì)掩蓋較小的測(cè)量信號(hào),一般用噪音的二倍來(lái)表示儀器的靈敏度。


      1.4波長(zhǎng)和吸光度準(zhǔn)確度

      樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長(zhǎng)下測(cè)得的,如果波長(zhǎng)誤差很大,測(cè)出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對(duì)儀器的直接要求,更應(yīng)引起足夠的重視。

      國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)透射比準(zhǔn)確度為*士0.6%, B級(jí)土1.0%。


      2測(cè)量條件的選擇

      2.1參比溶液和溶劑的選擇

      分光光度計(jì)的測(cè)量實(shí)際上是以通過(guò)參比池的光強(qiáng)度作為人射光強(qiáng)度來(lái)測(cè)定試樣的吸光度,先調(diào)節(jié)儀器使透過(guò)參比池溶液的吸光度為零,然后讓同一束光通過(guò)樣品,使得吸光度比較真實(shí)地反映待測(cè)物質(zhì)的濃度,所以參比溶液的選擇非常重要。

      如果僅有待測(cè)物質(zhì)與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收,可用純?nèi)軇┗蛘麴s水作參比溶液。如果顯色劑有顏色,并在測(cè)定波長(zhǎng)下有吸收,則用顯色劑溶液作參比溶液,所加人顯色劑及其它試劑的量,與試樣中的加入量應(yīng)一致。

      如果樣品中其它組分本身的顏色對(duì)測(cè)定有干擾,而所用顯色劑沒(méi)顏色,則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。

      正確選擇合適的溶劑,對(duì)提高分析的準(zhǔn)確度起重要作用。為減小溶劑中雜質(zhì)的影響,應(yīng)選擇高純度的溶劑;溶劑應(yīng)不與待測(cè)物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng);待測(cè)物在溶劑中要有一定的溶解度;在測(cè)定的波長(zhǎng)范圍內(nèi),溶劑本身沒(méi)有吸收,注意常用溶劑的最短可用波長(zhǎng);當(dāng)用揮發(fā)性大的溶劑時(shí),測(cè)量過(guò)程中吸收池應(yīng)加蓋。


      2.2測(cè)試波長(zhǎng)的選擇

      當(dāng)用分光光度計(jì)對(duì)溶液進(jìn)行測(cè)定時(shí),首先需要選擇合適的測(cè)量波長(zhǎng)。選擇的依據(jù)是該被測(cè)溶液的吸收曲線。在一般情況下,我們總是選擇最大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)量波長(zhǎng),這樣可以提高靈敏度。

      而在有些情況下最大吸收峰很尖銳、吸收過(guò)大或附近有干擾存在,就不能選最大吸收波長(zhǎng),而必須在保證有一定靈敏度的情況下,選擇吸收曲線中的其它波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定(曲線較平坦處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)),以消除干擾。繪制吸收曲線是正確選擇波長(zhǎng)的有效手段和方法。


      3、分光光度計(jì)的檢驗(yàn)小妙招

      波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的檢驗(yàn)

      分光光度計(jì)在使用過(guò)程中,由于機(jī)械振動(dòng)、溫度變化、燈絲變形、燈座松動(dòng)或更換燈泡等原因,經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實(shí)際通過(guò)溶液的波長(zhǎng)不符合的現(xiàn)象,因而導(dǎo)致儀器靈明度降低,影響測(cè)定結(jié)果的精度,需要進(jìn)行檢驗(yàn)。

      檢驗(yàn)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度zuijian單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測(cè)量?jī)x器的吸收峰值, 如果測(cè)出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定, 則需要進(jìn)行波長(zhǎng)調(diào)節(jié)。


      透射比正確度的檢驗(yàn)

      用透射比標(biāo)準(zhǔn)值分別為10 %、20 %、30 %左右的光譜中性濾光片,可見(jiàn)光區(qū)分別在440、546、635nm波長(zhǎng)處,以空氣為參比,分別測(cè)量各濾光片的透射比,紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長(zhǎng)處,以高氯酸溶液為參比,測(cè)量其透射比。


      穩(wěn)定度的檢驗(yàn)

      在零點(diǎn)不受光的條件下,用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn),觀察3分鐘讀取透射比的變化,即為零點(diǎn)穩(wěn)定性。在儀器測(cè)量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點(diǎn)后,蓋上樣品室蓋(打開(kāi)光門),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。 


      光的檢驗(yàn)

      可見(jiàn)分光計(jì)棱鏡式儀器在420nm處,光柵式儀器在360nm處,紫外分光計(jì)在220nm處分別用符合規(guī)定的截止濾光片,以空氣為參比,測(cè)量其透射比值,即為儀器在相應(yīng)波長(zhǎng)下的雜散輻射率。

                                                                                                                                        本篇轉(zhuǎn)載至實(shí)驗(yàn)之家 

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